艾滋病检测
2007年11月28日 13:39医学网 】 【打印

  如何进行HIV测试? 

  在中国各个城市大多数大医院和卫生防疫站都可以提供抗HIV测试。
  测试的收费标准各地不一,一般是五十元人民币左右。通常采用抽血检验的形式,抽血量很小,和检测肝功的血量差不多,在手臂血管采血。也有采用唾液测试的,但没有血液测试准确。
  测试后一般两三天内就可以得到结果,这取决于所在医院或防疫站的安排。测试是很快的,通常只要一到两个小时就可做完HIV检测。


  哪些情况下必须检测HIV病毒 

  HIV病毒检查方法复杂,价格昂贵,一般应有选择使用。下列情况需做HIV病毒检查:
  1、近期受HIV感染而尚未产生抗体者;
  2、HIV感染因素对婴儿可能造成威胁,但婴儿亦可能从母体被动获得HIV抗体而不能确定其意义者;
  3、HIV抗体实验阳性,尚无临床症状,需要监测疾病发展的人;
  4、评价抗HIV药物的效果。


  艾滋病的实验检查 

  一、免疫学检查:
  循环淋巴细胞显著下降,TH细胞减少,TH/TS大于1。0;T细胞功能下降,迟发型皮肤试验转阴,体外试验证明以非特异性有比分裂原刺激时,T细胞反应降低,T细胞的细胞毒作用下降,产生白细胞介素2及a-干扰素下降,乃细胞功能失调。多克隆性高球蛋白血症,对所搞原刺激不应生应有的抗体反应,自然杀伤细胞活性下降。
  二、病毒及抗体检查:
  检测病毒:细胞培养,分离病毒,检测病毒抗原,检测毒核酸及检测逆转录酶,检测HIV抗体,筛选试验有免疫学技术,酶联免疫吸附试验及放射免疫学试验,特异性较强的,有放射免疫沉淀试验及蛋白印迹法。


  艾滋病病毒抗体检测提示 

 

  确定您是否被艾滋病病毒感染的标准检测,是建立在血液中艾滋病病毒抗体而非病毒本身的发现上的。有诸如酶联免疫吸附实验(ELISA)和简单快速(A/R)检测这样不同类型的抗体检测方法。最近这些年中,一直在开发检测唾液和尿液中的艾滋病病毒抗体检测方法。
  一个人所做的第一种抗体检测,称为筛查试验。如果筛查试验阴性,这就意味着没有发现抗体。就认为被检测的人是艾滋病病毒阴性, 而不需要做确证试验。如果筛查试验反复阳性,就必须进行确证。可以使用如西方印迹试验或线形棉衣测定法(LIA)等特殊的检测方法进行确证。也可以联合使用酶联免疫吸附实验或简单快速检测确证阳性结果。虽然可以用同一份血样做确证试验,但为了避免任何差错,最好使用另外的一份血样做确证试验。
  有时,艾滋病病毒筛查试验可能给出假阳性报告,尤其是艾滋病病毒并不多见的人群中,这就是对筛查试验结果阳性的样本总要进行确证实验的原因。为了排除筛查的假阳性结果,这种确证是需要的。
  关于抗体的正确性
  平均而言,被艾滋病病毒感染后25天,艾滋病病毒检测才可显示阳性结果。这比引进现在采用的非常敏感的检测方法之前的时间间隔,缩短了很多。
  如果最近才感染,检测可能显示阴性结果。
  检测唾液和尿液时,需要更长的时间间隔,才能检测到抗体
  三个月后,99%以上的感染者,将显示阳性结果
  感染后三个月,99%以上的感染者,艾滋病病毒抗体检测阳性。


  不同时期艾滋病抗原抗体阳性的临床意义 

 

  对人体来说,艾滋病病毒侵犯的是细胞免疫系统的TH淋巴细胞,造成免疫能力缺陷,最终的病人大都以出现临床症状的晚期感染表现;对病毒本身特异的抗原和抗体来说,两者的消长可说明疾病的所处状态,同时指导临床分期的诊断。
  一旦查出抗原阳性,表示已感染艾滋病病毒,这包含两层意义或往往代表两个感染的不同阶段:如果艾滋病病毒携带者感染的病毒量大,那么,病毒在TH淋巴细胞中的繁殖量亦较大,虽然此时处于病毒感染的潜伏期,但血清中可查艾滋病病毒的抗原,对首次发现的艾滋病病毒的携带者来说,可作为早期诊断的依据,另一方面,随着感染病毒时间的推移,作为艾滋病病毒的抗原不断刺激机体产生抗体,当抗体产生的量大到足以全部中和抗原时,抗原在体内的血液中是查不到的,到了潜伏期快结束时,病毒的复制又明显增多,速度也加快,此时的血清中可再次出现艾滋病病毒的抗原,相应地TH淋巴细胞的体内水平则表现显著性下降,这常指示着艾滋病病毒潜伏期的终末,艾滋病即将出现,是疾病整个过程的晚期了。
  艾滋病的抗体产生时间, 往往是感染艾滋病毒后4-12周才开始,已不是感染的早期和“窗口”期(指病毒抗原消失,但抗体尚未出现的一段空白时期),而是潜伏期的指征。如果查出艾滋病病毒抗体阳性的人员,则应视为艾滋病病毒携带者。


  尿检将成为艾滋病检测的一种全新手段 

 

  由于在安全、便捷等方面更具优势,尿液检测已成为艾滋病(AIDS)检测的一种全新手段,并得到世界艾滋病预防中心的大力推荐,这是世界艾滋病基金会主席卢克·蒙塔尼日前在北京宣布的。
  作为艾滋病病毒的发现者,卢克·蒙塔尼博士是世界艾滋病研究领域的权威学者。他认为,人类若想在与艾滋病的这场战役赢得最后的胜利,必须在预防、检测和治疗三个领域齐头并进,忽略任何一个环节都会产生灾难性的后果。
  检测血液中的HIV抗体一直被认为是诊断AIDS的前提。传统的血液检测法对医院的环境设施及相关医务人员水平有较高的要求,检测周期也较长,而且还存在交叉感染的危险。但近来研究表明,在HIV感染者的尿液中也可检查到HIV抗体。这一发现为艾滋病检测提供了一个全新的发展方向。
  与血液检查相比,尿液检查有多种优点:尿液中一般不存在HIV病毒、采集时不会引起皮肤损伤。所以尿液HIV-1抗体检查是一种相对安全而便捷的检测方法。目前,由美国一家公司研制成功的HIV-1尿液WesternBlot试剂盒已经成为美国FDA及我国SDA批准的惟一尿液艾滋病检测试剂。据悉,这种新型的HIV检测试剂,将从今年10月起在我国推广使用。


  HIV感染时CD4、CD8细胞计数的意义 

 

  在T淋巴细胞分类中,CD4代表T辅助细胞而CD8代表T抑制细胞和T杀伤细胞。CD4+T淋巴细胞是HIV感染的主要靶细胞,而其本身又是免疫反应的中心细胞;CD8+T淋巴细胞是免疫反应的效应细胞。正常人的CD4+T淋巴细胞约占总的T淋巴细胞的65%,CD8+T淋巴细胞约占35%。人体感染了HIV后,涉及的主要病理过程就是免疫系统的损害,主要表现为:CD4+T淋巴细胞的丢失,绝对数量的减少,同时CD8+T淋巴细胞数量增加,CD4和CD8的比例失调。因此CD4+,CD4+T淋巴细胞记数作为直接测定免疫功能的方法,是提供HIV感染病人免疫系统损害状况最明确的指标。
  流式细胞术计数法原理
  流式细胞术(FCM)是对细胞和微粒进行快速、灵活、定量分析分类的高精技术,它融合了激光、电子计算机、单克隆抗体、荧光素化学、细胞化学染色等技术的优点。其基本原理是以激光为光源,将被检细胞用荧光标记抗体结合后输入流式细胞仪,通过高速流动系统对细胞排列成行,一个一个的流经检测区,当细胞从流动室喷嘴处流出时,超声振荡搅动液流,使液流断裂成一连串均匀的小滴,每滴内最多只含有一个细胞,细胞经荧光探针的光反应和标记物的光散射能力中获取信息,由光电倍增管接收并转化成脉冲信号,并进行增强,数据经电脑处理、分辨细胞的类型从而检测出各类淋巴细胞。
  CD4+T淋巴细胞记数测定的主要意义:
  ① 用于HIV感染者的疾病分期:凡CD4+T淋巴细胞<200/mm3或CD4+T淋巴细胞的百分比<14%的HIV感染者可归入艾滋病。
  ② 判断HIV感染者的临床合并症(各种机会性感染与CD4+T淋巴细胞的相关性),如CD4+T淋巴细胞<200/ mm3时,很容易发生卡氏肺囊虫肺炎;而巨细胞病毒感染和鸟分支杆菌感染常发生于CD4+T淋巴细胞<50/mm3的病人,极少见于CD4+T淋巴细胞>100/mm3的病人。
  ③ 帮助确定抗HIV药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症,例如,当CD4+T淋巴细胞<200/ mm3时,应给予抗卡氏肺囊虫肺炎的预防性治疗。
  ④ 抗HIV药物疗效的重要判断指标。


  血清HIV-1抗体检测 

 

  感染HIV-1后,机体针对HIV-1基因编码的抗原性物质产生相应抗体,在临床上具有重要诊断学意义的主要是对抗结构基因编码抗原(如gpl60,gpl20,gp41,p66,p55,p51,p31,p24,p17等)的抗体。
  由于个体差异、各种病毒蛋白的浓度和抗原性强弱不同及不同个体对不同抗原成分的反应性均有所不同,因此相应抗体的产生时间和不同个体对相同抗原成分的免疫应答强度等存在一定差别,此外,检测方法和使用试剂的敏感性不同对HIV-l抗体的检出时间产生一定影响。在感染HIV-1后,患者血清中最先出现p24抗原,继之,各种HIV-1抗原可达到高峰;2-6周后,随着HIV-l抗体产生及浓度的不断增加,HIV-l抗原渐趋降低或检测不出。临床通用的是酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹法(WesternBlot)和目前开始推广的快速诊断法。
  用于初筛实验的HIV抗体检测试剂必须是HIV-1/2混合型,经卫生部批准或注册,并在有效期内,通过批检检定合格,进口试剂还必须要求提供进口许可证和中国生物制品检定所检定合格证书。
  市售试剂大致可分为以下几类:
  第一代试剂:使用HIV全病毒裂解物为抗原,应用间接法原理检测HIV抗体。如日本富士公司生产的HIV-PA试剂。
  第二代试剂:使用在细菌或真菌中表达的人工重组或化学合成多肽HIV抗原,应用间接法原理检测HIV抗体。基因重组通常易于在培养基中生产大量同源性抗原,产品为单一目的基因而非多样性抗原混合,特异性高于第一代试剂。
  第三代试剂:使用合成多肽HIV抗原(少数用重组抗原),应用双抗原(或双抗体)夹心法原理检测HIV抗体(或抗原)。由于标记HIV抗原可同时检测血清中HIV-1 IgG、IgM、 IgA抗体,此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。
  第四代试剂:此类试剂在第三代试剂盒基础上,将针对P24抗原的抗体与HIV-1抗原一起包被固相载体,可同时检测HIV-1 IgG、IgM、 IgA抗体和P24抗。


  HIV抗体确认实验 

 

  根据卫生部规定,HIV-1抗体阳性报告必须由卫生部认证并取得资格的HIV抗体确认实验室出具才有法律效应。
  最常用的HIV-1抗体确认实验方法是免疫印迹法(Wwstern Blot,WB)和条带免疫印迹法(Strip Immunoblot Assay, SIA或Linear Immunoblot Assay, LIA),其中以WB法最常用。
  1.免疫印迹法 H IV抗体确认的首选方法,他能同时检测不同HIV-1抗原组分的抗体,因此能够鉴别或肯定初筛检测的结果。
  2.条带免疫印迹法 WB实验基本相同,只是条膜上抗原来源和组成有所区别。检测时信噪比高,本地清晰,无潜在假阳性干扰,且可通过调整条膜上HIV抗原量,克服了WB实验中使用病毒裂解产物而可能产生的固相载体上某些重要抗原量不足的缺点。这类试剂特异性很高,但也可能由于病毒株在所合成抗原决定簇部位发生突变导致HIV抗体假阴性结果;另一个缺点是由于合成抗原不能糖基化,其立体构像与天然抗原分子有一定差异,在一定程度上可能影响了模拟真实HIV抗原检测抗体的能力。
  HIV-1抗体确认实验结果的评价
  免疫印迹实验的结果是根据硝酸纤维素条膜特异性HIV抗原位置上出现的带型不同来判断HIV抗体为阳性、阴性和不确定。
  阳性和阴性结果的判断标准:美国CDC的标准为国际公认。
  阳性和阴性结果的判断标准
  HIV-1抗体阳性:仅gp41Gp120/gp160加上gp41或P24
  HIV-1抗体阴性:没有条带;零星条带
  HIV抗体不确定(或可疑)结果的评价 在某些情况下,样品显示不典型的HIV反应性条带图谱,既不能确定为阳性也不能确定为阴性,称为HIV抗体不确定或可疑阳性。
  以下原因可能导致HIV-1抗体不确定结果的出现:
  ①HIV-1急性感染后,抗体刚出现,仅显示gp160或120,或P24,P31,P55带;此时ELISA往往已显示阳性反应;
  ②非特异反应,如在高丙球蛋白血症,某些病毒性疾病和寄生虫感染,自身免疫性疾病等情况下可出现该现象;
  ③极少数晚期艾滋病患者;
  ④与HIV裂解物中的宿主细胞成分发生交叉反应;
  ⑤样本交叉污染。
  对HIV抗体不确定的受检者必须进行随访,通常为每3个月1次,共随访2次。如随访过程中出现特异性HIV抗体反应条带如gp160或120,则做出HIV-1抗体阳性结论。如随访6个月后带型消失或没有变化,则做出HIV抗体阴性报告。

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   编辑: 刘延清
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